糖類分離柱是用于分離糖類化合物的色譜柱,廣泛應用于食品、醫藥、化工等領域的糖類分析。
糖類分離柱的分離原理主要是基于配體交換反應。糖分子上的羥基可被去質子化而帶有負電荷,這些負電荷與樹脂表面上的金屬離子的正電荷之間相互作用,使糖被保留,從而達到分離的目的。
通過填料表面的抗衡離子(如鈣、鉛)與糖類分子間的吸附與解吸平衡,實現果糖、葡萄糖、蔗糖等單糖、雙糖的分離。適用于純水或稀酸流動相環境,可有效分離糖醇類物質。
填料特性
常見填料為苯乙烯-二乙烯基苯共聚物,表面鍵合磺酸基團或鈣離子配體,通過尺寸排阻與離子交換機制協同作用,提升分離效率。
樣品前處理
溶解于流動相體系,經0.45μm濾膜過濾,去除顆粒物和蛋白質。
離心(轉速≥8000rpm,時間10分鐘)進一步凈化。
進樣控制
單次進樣量:氨基柱≤20μL(濃度≤20mg/mL),鈣離子交換柱≤50μL。
避免過量進樣導致色譜峰展寬或固定相過載。
流動相管理
使用前通過0.5μm濾膜過濾,超聲脫氣≥20分鐘。
沖洗管路和進樣閥(體積≥10倍管路體積),防止污染。
柱溫與流速
柱溫:單糖分析30-40℃,多糖分析40-50℃,溫度波動≤±1℃。
流速:常規0.8-1.2mL/min,避免柱壓過高(氨基柱柱壓需<20MPa,鈣離子交換柱需<15MPa)。
長期保存
氨基柱:無水有機溶劑(如純乙腈、異丙醇)封閉,每3個月更換保存液。
鈣離子交換柱:含微量防腐劑的保存液,每月沖洗5-10CV后重新密封。
聚合物基質柱:50%甲醇水溶液封閉,保存溫度0-10℃。